Technical Articles

技术文章

当前位置:首页  >  技术文章  >  T4 DNA连接酶的作用原理

T4 DNA连接酶的作用原理

更新时间:2024-02-23      点击次数:408
  T4 DNA连接酶可以催化粘端或平端双链DNA或RNA中毗邻的5’磷酸基团和3’ 羟基末端之间形成磷酸二酯键。酶还可以修复双链DNA,RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口,连接DNA的粘性和平末端,但是该酶对单链核酸无酶活性。
  T4 DNA连接酶的作用过程可以分为3个步骤:
  1、连接酶的赖氨酸活性位点对ATP的α-磷酸基团亲核攻击,释放PPi,并生成T4 DNA连接酶-AMP中间体。
  2、DNA链的5' -磷酸基团攻击连接酶-AMP中间体,AMP被转移到DNA链的5' -磷酸基团上,生成DNA-腺苷酸中间体。
  3、DNA链的3' -羟基进攻5' -磷酸基团,形成磷酸二酯键,释放AMP。
  使用注意事项:
  1、使用前应在室温放置至融化或用手掌温度辅助融化,然后置于冰上。不要加热融化以免ATP降解。
  2、T4 DNA Ligase对热敏感,容易失活。使用时请放置冰上,用后立即置冰箱中冷冻保存。
  3、如需在接反应后灭活T4 DNA Ligase,可于65℃孵育10min即可。
17717645179
欢迎您的咨询
我们将竭尽全力为您用心服务
QQ:2196924459
关注微信
版权所有 © 2024 上海恪承生物科技有限公司  备案号:沪ICP备2023011015号-1