NEB PNGase F （ 无甘油 ）

概述

PNGase F 是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的 N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：内侧的 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间。PNGase F 还提供不含甘油的形式，便于在 HPLC 方法中取得*效果。

来源

NEB #P0704 和 NEB #P0705 是从脑膜败血性黄杆菌（Flavobacterium meningosepticum）中提取纯化。

NEB #P0708 和 NEB #P0709 *自和平空间站伊丽莎菌（Elizabethkingia miricola，formerly Flavobacteriummeningosepticum）并在 E. coli 中高度表达。

反应条件

将糖蛋白于 1X 糖蛋白变性缓冲液（含 0.5% SDS，40mM DTT）中 100℃ 煮沸 10 分钟使其变性，再在加入1% NP-40 的 1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中，37℃ 温育进行反应。热失活：75℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

10X 糖蛋白变性缓冲液

10X GlycoBuffer 2 缓冲液

10% NP-40

分子量

36,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染，无糖苷内切酶 F1、F2和 F3 活性，无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中，37℃ 条件下 1 小时 从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95%的碳水化合物所需要的酶量（65 NEB units = 1 IUB milliunit）。

浓度

500,000 units/ml。

注意事项

已知 PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反应混合物中必须加入 NP-40。要使天然糖蛋白去糖基化，建议增加酶量并延长温育时间。

要使非变性糖蛋白去糖基化，建议增加酶量并延长温育时间。