基因工程中用到的连接酶主要是大肠杆菌DNA连接酶以及T4 DNA连接酶,目前后者的应用更为广泛。T4 DNA连接酶属于DNA连接酶的一种。在载体构建和酶切连接的分子克隆中,可借助T4 DNA连接酶将插入片段连入载体中。T4 DNA连接酶催化双链DNA中邻近的3′-羟基-和5′-磷酸末端之间形成磷酸二酯键。双链DNA中单链切口也被T4 DNA连接酶封闭。
T4 DNA 连接酶的功能特点:
连接类型:T4 DNA连接酶具有广泛的底物特异性,它可以连接双链DNA的粘性末端和平头末端。此外,它还可以催化双链RNA以及双链RNA与DNA之间的连接,但不能催化单链核酸的连接。需要注意的是,虽然T4 DNA连接酶可以连接平末端,但连接效率相对较低。
应用广泛:在基因工程中,T4 DNA连接酶被广泛应用于DNA片段的连接、质粒的构建、基因克隆等实验操作中。